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      富含生物活性因子丨SIS材料中生長因子的定量檢測研究


      作者:本站編輯    發布日期:2024-03-15


      博輝瑞進具有自主知識產權的SIS生物材料,主要成分包含 I、III 型膠原、纖維連接蛋白和多種生長因子(TGF-β、VEGF和FGF等)。生長因子是由多種細胞分泌,作用于特定的靶細胞,調節細胞分裂、基質合成與組織分化的細胞因子,有助于細胞功能的增強和血管化的形成。

      本文重點對SIS材料中三種生長因子(TGF-β、VEGF和FGF)進行定量檢測,并通過兩種實驗方法得出檢測結果。該文章已于2018年5月發表于《材料科學》期刊,以下為部分摘錄內容。

      封面(1).png

      圖為:20185月《材料科學》期刊封面


      生長因子介紹


      TGF-β,是一種豐富的骨基質蛋白,也是一種肽類抗炎癥生長因子,廣泛存在于正常組織及轉化細胞中,在血小板和骨組織中含量較高,在骨形成和骨重建過程中發揮著極其重要的作用,可以通過控制免疫細胞(T細胞、B細胞等)的增殖、分化和活化來進行免疫調節,促進傷口愈合以及血管生長。

      VEGF,是對血管內皮細胞具有高度特異性的血管源性生長因子,由血小板、血管平滑肌細胞、內皮細胞、成骨細胞或腫瘤細胞等合成和分泌,對于新血管形成至關重要,具有增加血管通透性和促進內皮細胞增殖等功能,還具有保護神經的作用。

      FGF,是一組具有相似結構特征的多肽,廣泛存在于機體組織內,具有很強的促細胞分裂和增殖活性的作用,可誘導毛細血管的生成。

      SIS材料成分(1).png

      圖為:動畫示意,SIS材料中富含I、III 型膠原、纖維連接蛋白和多種生長因子(TGF-β、VEGF和FGF等)


      提取方法介紹


      方法一:稱取SIS材料粉碎后樣品5mg,加入1mL Buffer 1,高速低溫勻漿20~30 min 至液體呈膠體狀,14000 rpm 高速離心30 min,提取上清液,定容到1mL,4℃保存。

      方法二:稱取SIS材料粉碎后樣品5 mg,加入1mL Buffer1,高速低溫勻漿20~30 min至液體呈膠體狀,于4℃勻速攪拌24 h,14000 rpm 高速離心30 min,提取上清液,定容到1 mL,4℃保存。


      ELISA 檢測法


      TGFβ1和VEGF采用雙抗夾心ELISA法,FGF2采用競爭抑制ELISA法。

      將兩種方法處理的樣品按ELISA試劑盒說明書操作,操作步驟如下(以TGFβ1為例):

      1) 加樣:分別設置標準孔、待測樣品孔、空白孔,依次加入100μL不同濃度的標準品和樣品,空白孔加標準品緩沖液,酶標板覆膜后37℃溫育1 h,棄去液體后甩干;

      2) 每孔加檢測溶液A工作液100μL,37℃溫育1 h,棄去液體,每孔用350μL洗滌液洗滌1~2 min并甩干,該過程重復3次;

      3) 每孔加檢測溶液B工作液100μL,37℃溫育1 h,棄去液體,每孔用350μL洗滌液洗滌1~2 min并甩干,該過程重復5次;

      4) 每孔加90μL TMB底物溶液,37℃避光顯色(10~20 min),每孔加50μL終止溶液終止反應,輕輕搖勻;

      5) 立即用酶標儀在450nm波長測量各孔的光密度值(O.D.值);

      6) 根據標準品建立標準曲線,代入公式得到樣品中活性生長因子含量,再換算成其在 SIS 補片樣品干重中的含量。


      檢測結果


      TGFβ1檢測結果

      根據ELISA試劑盒不同濃度的TGFβ1標準品在450nm波長下的光密度值(O.D.值)做成標準曲線,如圖1所示。

      圖1-標準曲線(1).png

      1:不同濃度 TGFβ1 標準品的 O.D.值標準曲線


      如圖2所示,通過方法一檢測SIS中TGFβ1的含量為5391±370 pg/g,方法二檢測SIS中TGFβ1的含量為8375±2125 pg/g。

      圖2:TGFβ1(1).jpg


      圖2兩種處理方法的 TGFβ1 檢測結果對比


      VEGF檢測結果

      根據ELISA試劑盒不同濃度的VEGF標準品在450nm波長下的光密度值(O.D.值)做成標準曲線,如圖3所示。

      圖3-標準曲線(1).png


      3:不同濃度 VEGF 標準品的 O.D.值標準曲線


      如圖4所示,通過方法一檢測SIS中VEGF的含量為3974±871pg/g,方法二檢測SIS中VEGF的含量為5486±1043 pg/g。

      圖4:VEGF(1).jpg

      4:兩種處理方法 VEGF 檢測結果對比


      FGF2 檢測結果

      根據 ELISA 試劑盒不同濃度的 FGF2 標準品在 450 nm 波長下的光密度值(O.D.值)做成標準曲線,如圖 5 所示。

      圖5-標準曲線(1).png

      5:不同濃度 FGF2 標準品的 O.D.值標準曲線


      如圖6所示,通過方法一檢測SIS中FGF2的含量為3990±1372 pg/g,方法二檢測SIS中FGF2的含量為2668±384 pg/g。

      圖6:FGF2 (1).jpg

      圖6兩種處理方法 FGF2 檢測結果對比


      結論


      生長因子對提取條件要求非常嚴格,不同的生長因子由于其種類和作用機制的不同,其適宜的提取方法也不盡相同。該實驗通過對 SIS 材料生長因子的預處理方法的比較,得到三種生長因子(TGFβ1、VEGF、FGF2)最適宜的提取方法并檢測其含量。其中博輝SIS中 TGFβ1的的含量為8375±2125 pg/g、VEGF的含量為5486±1043 pg/g、FGF2的含量為3990±1372pg/g。

      創面愈合是一個復雜的生物學過程,生長因子在改善各種生理和病理狀態、促進組織再生、修復及創傷愈合過程等方面發揮著重要的作用,在促進肉芽組織形成的同時,加速創面再上皮化進程。

      博輝瑞進具有自主知識產權的SIS材料,具有生物相容性好、促進組織再生修復、加速血管新生、耐受感染等優勢,采用非交聯工藝制備,無化學試劑添加,產品隨組織再生可完全降解吸收,無異物殘留。廣泛用于肌腱、硬腦膜、腹壁、皮膚、口腔等組織的修復和重建。

      材料優勢(1).jpg


      SIS材料優勢


              博輝瑞進口腔生物膜產品,由SIS材料制備而成,是軟組織修復和高效成骨的有力保障。產品生物相容性好,非交聯工藝制成,隨組織再生可完全降解,不影響新骨形成和新骨質量;植入口腔受損區域后,可有效起到屏障保護作用,保護來源于周圍骨組織的血供以及血管原和骨原細胞。同時可實現血管快速長入,誘導組織修復再生。具有良好的柔順貼合性和親水性,可更好的貼合在缺損區,便于手術操作;富含生物活性物質,可促進細胞貼附和組織再生;優良的耐受感染性,可減少創口感染幾率,是臨床上較為理想的口腔生物膜產品。

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